L-3000 HPLC标准操作规程
的有关信息介绍如下：
该经验描述了L-3000高效液相色谱系统的标准操作规程。
此规程规范RIGOL L-3000系列高效液相色谱系统及其工作站的使用和维护。
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★配制所需流动相（HPLC级），用对应的0.45um滤膜过滤，超声脱气20min
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【注意】市售滤膜一般分为两种，一种用于过滤水相，一种用于过滤有机溶剂（或含有机溶剂的溶液），使用时注意对应关系，以免造成滤膜溶解并污染流动相。滤膜均为一次性，不可反复使用。
【注意】使用了缓冲盐溶液时，一定要过滤。磷酸盐缓冲液和乙腈混合时容易析出细小的颗粒，建议预先混合好再过滤。
【注意】不管是否配有脱气机，溶剂在使用前均需要先超声脱气。超声脱气的时间不宜过长，以防溶剂温度过热。
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★准备系统清洗液。柱塞杆冲洗（seal-wash/后冲洗）流路使用10%异丙醇水溶液作为清洗液；如配有自动进样器，配制相应的清洗液加入到进样器清洗瓶中。
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【注意】用于清洗柱塞杆（seal-wash）的清洗液推荐使用10%异丙醇水溶液，切不可使用甲醇、90%甲醇等高比例有机溶剂，以防造成盐析出。
【注意】进样器清洗液推荐使用对样品有较好溶解度，且不易产生气泡的溶剂，切不可使用含有缓冲盐或腐蚀性试剂的溶液作为清洗液。
【注意】冲洗液在使用前也需要超声脱气。
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★配制样品和标准溶液，用对应的0.45微米（或0.2微米）针式过滤器过滤。
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【注意】与滤膜相似，市售针式过滤器一般分为两种，一种用于过滤水相，一种用于过滤有机溶剂（或含有机溶剂），使用时注意对应关系，以免污染样品。
【注意】过滤器均为一次性，不可反复使用。
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★根据相应的检测方法安装好合适的色谱柱（注意方向）和定量环（可参考视频）。
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【注意】请根据实验的需求选择合适的色谱柱，一般可以在方法中找到对色谱柱的要求。色谱柱具有方向性，安装时确保色谱柱的方向与流动相流动方向一致。
【注意】请选择与进样量相匹配的定量环。过大的定量环会增加系统的延迟体积，过小的定量环则无法满足分析需求。
【注意】如果经常分析复杂样品（如中药、生物制品等），建议在色谱柱前加装预柱（保护柱），以避免色谱柱堵塞。预柱的工作原理是牺牲自己，保护分析柱。因此预柱的柱心需要及时更换，以免影响分离性能。
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★检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否正确连接，废液管和废液瓶是否接好。
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【提示】可到“视频教程”栏目观看管路连接的教学视频。
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★依次开启L-3000各模块电源，打印机、电脑显示器与主机电源。接通电源后，仪器将进行自检，待自检结束后，运行RIGOL色谱工作站软件。
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【提示】可到“视频教程”栏目观看针对工作站的教学视频。
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★更换流动相。将对应的滤杯浸入装有少量新流动相的烧杯中，轻轻摇晃以置换虑杯中残留的旧流动相。然后，将虑杯放入装有新流动相的溶剂瓶中。按此方法更换好所有的流动相。
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【注意】如果系统配备的是L-3220二元高压梯度泵，使用A泵输送水相，B泵输送有机相。如果系统配备的是L-3240/L-3245四元低压梯度泵，使用A泵输送水相，B泵输送有机相，C通道与D通道用户可自定义。
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★泵排气泡。逆时针转动泵的放空阀约90度，打开放空阀。开启工作站并登录、连接到仪器。在设备监视器界面，点击“清洗”，将流速设定为3-5mL/min，冲洗5-10分钟，直至流动相进液管路和放空阀排废液管路中无可见气泡。重复以上步骤完成所有通道的清洗工作，并顺时针旋紧放空阀。
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【注意】放空阀开启的角度不宜过大，否则可能在废液管中看到连续流出的气泡。
【注意】必要时，用针筒连接放空阀排液管，辅助抽出泵头内的空气，直至管线内无可见气柱。
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★进样器排气泡（如果配有自动进样器）。在设备监视器界面自动进样器模块，点击“初始清洗“，排除进样器中的气泡。可反复操作2-3次以确保气泡排除干净。
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★在色谱工作站中打开”在线清洗“功能，并设定清洗速度为中速，用10%异丙醇水溶液清洗泵头。
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【注意】如果使用含缓冲盐的流动相，必须使用在线清洗。若未配备该功能，请使用虹吸方式进行冲洗，速度为20滴/min左右。建议日常使用是也进行在线清洗，使泵头清洗腔处于湿润状态，可有效延迟密封圈使用寿命。
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★通过Clarity色谱工作站选择所需的使用方法。如需新建方法，请按照工作站说明书的指导，依次设置仪器各组件、积分和校正等参数，然后保存并发送方法。如配有自动进样器，请在工作站中设置样品的”序列“方法。点击”发送方法“，系统将自动开始平衡。
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【提示】可到“视频教程”栏目观看针对方法的教学视频。
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★检查管路连接、柱接头及系统各处是否漏液。
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★观察压力变化，压力波动若不平稳，可初步判断系统中仍有气泡，请重复排气泡操作。
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★观察数据采集界面中的基线变化，若漂移和噪声均达到较小的数量级且压力平稳，可认为系统已经达到平衡，可以进样。
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【注意】基线稳定前，确保至少有5-10倍柱体积的流动相通过系统。
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★手动进样。按照以下步骤完成一次手动进样：
（1）确保进样针干净，使用样品润洗进样针至少1次；
（2）抽取所需体积的样品，排除进样针中的气泡；
（3）将进样阀手柄转至Load位置，将进样针完全插入进样阀入口中（在进样针即将到达底部时会遇到些许阻力，这时稍用力克服阻力即可完全插入），平稳的注入样品溶液；
（4）将进样阀手柄快速转至Inject位置，仪器将自动运行，采集数据记录色谱图；
（5）维持进样状态，直到下次进样前再次将进样阀切换回Load位置并拔出进样针；
（6）重复以上操作，继续进行样品测试。
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【注意】如果采用满环进样，进样量应至少为定量环体积的3〜5倍，以保证更佳的进样重复性。如果采用部分进样，使用进样针定容进样时，进样量应小于定量环体积的50%，并且保证每次进样体积应准确。
【注意】进行不同浓度的标样测试时，进样浓度应从低到高。
【注意】需使用仪器配备的专用平头进样针，切不可使用箭头进样针，以免划伤密封垫。
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★自动进样。对于配备了自动进样器的设备，可使用“序列”功能自动完成多个样品的分析。
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【注意】如使用梯度方法，建议进样前执行1~2次空白梯度。
【注意】如果无人值守状态下连续自动进样，务必检查序列设置是否正确，流动相是否足够，以免液路走空造成对密封圈及柱塞杆的磨损。同时需要检查废液瓶是否有足够空间，以防废液溢出。
【提示】可到“视频教程”栏目观看针对序列的教学视频。
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★积分。积分是指查找并定义色谱图中的色谱峰，并给出主要参数。可参考以下视频进行积分操作。
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【提示】可到“视频教程”栏目观看针对积分的教学视频。
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★校准。校准是利用已知浓度的标准样品，来测定未知样品的浓度。
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【提示】可到“视频教程”栏目观看针对校准的教学视频。
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★报告。设置“报告设置”中的报告选项并打印报告。
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【提示】可到“视频教程”栏目观看针对报告设置的教学视频。
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★清洗自动进样器。如配有自动进样器，运行色谱工作站的自动进样器清洗功能。
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★清洗进样阀。使用手动进样，在实验完毕后，使进样阀保持在“Inject”状态下，用注射器分别将超纯水-甲醇(90：10)、甲醇注入进样阀进行清洗；清洗完毕将进样阀切回（Load）状态，用进样阀的堵帽盖好进样口。
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【注意】清洗手动进样阀时，一定使用标配的白色清洗头，只有这样才能彻底清洗干净。使用进样针无法有效的清洗进样阀针导管部分。
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★清洗系统及色谱柱。
##反相系统##
情况一：如果流动相中没有盐，用甲醇冲洗30min；
情况二：如果流动相中含有盐，使用完毕后先用与流动相同比例但不含盐的溶剂冲洗系统，再用超纯水-甲醇(90:10)以1mL/min冲洗40min以上，最后用甲醇冲洗30min以上。
##正相系统##
使用合适的正相溶剂冲洗（根据色谱方法而定，并仔细阅读色谱柱说明书）。
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【注意】请勿将泵保存在纯乙腈和纯水流动相中。乙腈易使单向阀阀球和阀座粘结，引起泵工作异常；纯水容易滋生菌类，造成系统堵塞。
【提示】如果仅使用泵冲洗色谱柱，可将检测器的氘灯和钨灯关闭，以节约灯的使用寿命。
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★清洗完成后，在色谱工作站中点击“停泵”，将流速降到0，然后退出工作站。依次关闭系统所有模块电源，电脑主机和显示器电源。
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★按照要求填写仪器使用记录。
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【提示】离开实验室前，请再次检查实验室。关闭不用的仪器及设备电源，节能减 排。流动相瓶及有机溶剂瓶请密闭保存，长时间不用时请密封保存。
