冷冻干燥的方法

冷冻干燥的方法

最近小编收到很多问题，其中一个就是下面小编为大家整理一下关于冷冻干燥的方法的步骤，希望这些方法能够帮助到大家。

首先，准备安瓿管，安服管先用2% HO 设泡8 10,用自来水冲洗多次，最后用悲馏水洗1~2次.烘干。将印有商名和援种日期的标答放人安能管内，有字的一面应向管壁，管1塞上棉花，0.1MPa 灭菌30 min。

然后，制备脱脂牛奶，先将牛奶煮沸，除去上面的一层脂肪，然后用脱脂棉过德，并在3 000 t/min 的离心机中离心15min.如果一次不行，再离心一次，直至除尽脂肪为止，牛奶脱脂以后，0.056 MPa 灭菌30 min 并作无菌试验。

然后，制备菌悬液，以3~4ml无菌脱脂牛奶于培养成熟的斜面菌种里，用吸量管轻轻刮取斜面上的菌苔，使成分散均匀的浓厚悬液，细胞数控制在10~10个/ml。

然后，进行分装，用无菌长滴管或毛细吸管，吸取菌悬液滴人灭菌扦烘千的安瓿管底部，勿沾染管壁上，每管0.2 ml。

然后，进行预冻，把安瓿管中的菌悬液冻结成冰,使水分在冻结的状态下升华,以免在真空干燥时菌悬液沸腾，发生气泡而外溢。预冻的温度要低、速度要快，可以放入低温冰箱中( -45~- 35C)进行，也可以在无水乙醇干冰浴中进行，预冻的温度若高于-25C，则菌悬液结冰不坚实,真空干燥时易失败。

然后，冷冻干燥，将安瓿管外部的棉塞剪去,把内部的棉塞推至管口下面1cm左右，再用橡皮管将安瓿管与分支管上的侧管连接起来。分支管的另一端与真空泵连接。所有的连接处均用液体石蜡密封。然后将安瓿管放人饱和冰盐水中，待安瓶管底部的悬液完全冻结时,立即开动真空泵抽气，至样品外观已基本干燥时，将分支管升高，离开冰浴置室温中，再继线抽气干燥1h 左右。

最后，进行测定水分，将干燥样品以失重法测定残留水分，检查其干燥的程度。一般控制残留水分在3%以下，若高于3%则需继续进行真空干燥。